科研工作者應(yīng)該怎樣選擇抗體

上海恒遠(yuǎn)生物提示：

得高質(zhì)量、合適的抗體試劑也并非難事，我們需要在以下三個方面加以甄別：1.的抗體供應(yīng)商；2.過硬的冷鏈物流體系；3.正規(guī)的銷售（直銷/分銷）渠道。
 
1. 的抗體供應(yīng)商
的抗體供應(yīng)商應(yīng)具備以下條件或者能為客戶提供以下信息：抗原序列選擇、抗體純化方式、抗體驗證數(shù)據(jù)、應(yīng)用指南。
 
i.  抗原序列選擇
抗原序列選擇至關(guān)重要，直接決定了抗體的特異性/低交叉反應(yīng)和抗體產(chǎn)量，因此抗原序列選擇不僅要保證全基因組內(nèi)同源序列zui低，同時還要排除信號肽和蛋白跨膜區(qū)序列。
 
ii.  抗體純化
抗體純化目前主流的三種方式分別是：鹽析法粗純、ProteinA/G通用型純化和特異抗原純化柱，三種方式的純化效果和抗體效價依次提高。其中Protein A/G通用型純化的效果和成本適中，目前大部分抗體試劑公司都采用該方式進行大規(guī)?？贵w生產(chǎn)。要想獲得較高質(zhì)量的抗體，需要通過特異抗原純化柱，但由于涉及固定特異抗原等操作，成本相應(yīng)是zui高的，然而，使用該方法純化出來的抗體純度和特異性zui高。
 
iii.  抗體驗證數(shù)據(jù)
目前很多供應(yīng)商都有抗體驗證數(shù)據(jù)，但我們并不知道這些驗證數(shù)據(jù)的具體來源。很多抗體都有WB驗證數(shù)據(jù)，但很少有供應(yīng)商標(biāo)明WB是在哪些細(xì)胞系內(nèi)驗證，如果是過表達(dá)的細(xì)胞系，那WB驗證意義就不大了。同樣，免疫組化或免疫熒光也存在類似問題，驗證的數(shù)據(jù)具體來源于哪種組織、哪種病理樣本鮮有提及。而來源不同，實驗結(jié)果會千差萬別。供應(yīng)商往往用一種zui容易得到實驗室數(shù)據(jù)的樣本做實驗，但這樣的抗體用到我們自己的實驗時，往往會有多種問題出現(xiàn)。
 
iv.  應(yīng)用指南
抗體供應(yīng)商一般會根據(jù)驗證數(shù)據(jù)推薦相關(guān)的應(yīng)用，所以驗證數(shù)據(jù)對于應(yīng)用有決定性作用。應(yīng)該特別注意，同一支抗體可以做WB，卻并不一定適合于免疫熒光或免疫組化，反之亦然。因此，供應(yīng)商的抗體驗證數(shù)據(jù)就顯得非常重要了。
 
以上列出了抗體供應(yīng)商的4條硬性要求，現(xiàn)實中有哪些能很好地做到以上幾點呢？下面以Sigma-Aldrich提供的HPA金標(biāo)抗體為例。 HPA金標(biāo)抗體由Human Protein Atlas (HPA)Project設(shè)計并驗證。
 
1）HPA金標(biāo)抗體抗原選擇
HPA金標(biāo)抗體的免疫抗原是重組人蛋白表位識別標(biāo)簽(PrESTs)，表位識別標(biāo)簽一般含有50-150個氨基酸。表位識別標(biāo)簽經(jīng)過設(shè)計和篩選，使得它們含有*的表位，并且適合激發(fā)高特異性的抗體產(chǎn)生。通過對人全基因組掃描的方式，確保用于生產(chǎn)抗體的蛋白表位識別標(biāo)簽與其它蛋白有zui低的同源性。同時，抗原表位還會排除信號肽和蛋白跨膜區(qū)。
 
2）HPA金標(biāo)抗體親和層析純化
HPA金標(biāo)抗體通過親和層析方式進行純化(以PrESTs抗原作為配基，特異抗原純化柱)，采用三步法免疫層析的純化工藝：HisABP特異性標(biāo)簽去除，PrESTs特異性捕獲，zui后通過排阻色譜進行緩沖液的交換，不僅保證了抗體的純度，同時有利于抗體長期保存。
 
3）HPA金標(biāo)抗體驗證
每一支HPA金標(biāo)抗體都經(jīng)過蛋白芯片、免疫組化、WB和免疫熒光的實驗驗證，驗證的數(shù)據(jù)量不僅巨大——每支抗體超過700張實驗驗證圖片（病理學(xué)家認(rèn)證并注釋）在線查詢，而且，驗證數(shù)據(jù)是來自于不同組織和細(xì)胞系樣本，還會結(jié)合參考文獻以及生物信息學(xué)預(yù)測，確保每一個實驗數(shù)據(jù)的可靠性。
 
4）HPA金標(biāo)抗體應(yīng)用指南
HPA金標(biāo)抗體主要以免疫組化/免疫熒光為主，大部分抗體同時支持WB實驗?；诙喾N組織或者細(xì)胞的驗證結(jié)果，給廣大科研工作者提供了寶貴的數(shù)據(jù)參考。
 
綜上， HPA金標(biāo)抗體可稱得上是抗體*，而Sigma-Aldrich算是的抗體供應(yīng)商之一。
 
2. 過硬的冷鏈物流體系
目前冷鏈物流體系已經(jīng)非常成熟，各家供應(yīng)商一般都能保證抗體的低溫運輸。對于供應(yīng)商而言，主要是舍得投入，這一點做得比較突出的有Sigma-Aldrich，抗體收到后，一般冰盒還能堅持2-3天，足以讓使用者安心實驗。
 
3. 正規(guī)的銷售（直銷/分銷）渠道
在國內(nèi)，銷售渠道是問題突出的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，尤以假抗體試劑為甚，很多產(chǎn)品在包裝上其實是可以辨別的（科研工作者很少關(guān)注，往往以價格為導(dǎo)向）。在利益的驅(qū)使下，部分經(jīng)銷商經(jīng)常會自己制作抗體試劑，貼上假冒標(biāo)簽以次充好；另一個很普遍的現(xiàn)象是從正規(guī)渠道購得抗體試劑，通過小作坊稀釋分裝后，再出售給科研工作者。無論是以次充好，還是稀釋分裝，都會給科研工作者都帶來很多實驗風(fēng)險，zui后買單的始終是廣大中國科研工作者，不僅耗費金錢和人力，更難以彌補的是寶貴的時間成本。
 
因此在購買渠道上，建議大家盡量從經(jīng)銷商處購買抗體試劑，抑制假貨的流通。同時，隨著電子商務(wù)平臺的成熟，大家可以直接在各大訂購試劑，這是zui安全便捷的購買渠道。關(guān)于這點，免不了再次提及Sigma-Aldrich，Sigma-Aldrich是早實行電子商務(wù)的生命科學(xué)產(chǎn)品供應(yīng)商，并且以直銷為主導(dǎo)，避免了中間流通環(huán)節(jié)的問題，加上其強大的物流體系，很大程度上降低了銷售環(huán)節(jié)可能帶來的實驗風(fēng)險。
 
面對紛繁復(fù)雜的抗體市場，建議大家購買抗體試劑時謹(jǐn)慎選擇，切勿貪圖小利，通過正規(guī)銷售渠道購買供應(yīng)商的抗體，zui大限度降低因抗體質(zhì)量問題給我們帶來的損失。

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